呋喃唑酮（furazolidone）又名痢特灵，是一种抗菌类物质，具有抑菌性和杀菌性，可用于防治球虫病、细菌性痢疾等畜禽疾病，还可用作治疗和预防猪、牛及家禽病的抗微生物类药物。然而，因其在动物体内的残留，食用鱼类禁用，其他动物的使用剂量也必须严格控制，因此对呋喃唑酮及其残留产物进行定量检测十分必要。目前，世界上许多国家和地区对部分人药、兽药的使用及添加剂量都颁布了相应的法令和法规加以限制。例如美国的食品和药品管理局（ＦＤＡ）规定的禁用和限用的食用动物用药包括：氯霉素、克伦特罗、己烯雌酚、硝基咪唑类物质、呋喃唑酮、硝基呋喃和一些磺胺类药物（泌乳奶牛用）等。我国于1999年制定出《饲料和饲料添加剂管理条例实施细则》，对食用动物用药及其剂量都有明确规定。
1呋喃唑酮的测定方法
呋喃唑酮呈黄色粉末状，味苦，微溶于氯仿，不溶于水和乙醇，其分子量为225.16，熔点245－258℃。它是由乙醇胺经缩合反应，亚硝化、环合、还原后再经缩合而制得的。以往理论认为：呋喃唑酮是一种光敏性物质，见光易分解。目前，在分析化学领域采用紫外分光光度法能测出其最终光分解总量，结合高效液相色谱法对其光分解溶液的4种分解产物进行分析，发现仅有很小部分发生了分解；而运用质谱仪和远红外光谱仪也可证实呋喃唑酮一般较稳定，不易分解。下面对呋喃唑酮的分析测定，就质量检测法、分光光度法和高效液相色谱法分别作一介绍。
1.1质量检测法此法是将饲料碾碎过筛后，分别用二甲基甲酸胺（DMF）试剂和乙二胺试剂进行测试。
1.1.1DMF测试放9滴DMF和1滴氢氧化钾醇溶液于白色凹盘中的3个低凹处，再将0.01g 饲料试样喷洒到每个低凹处液滴上，用显微镜观察，当呋喃唑酮含量大于25mg/kg时，会生成易于观测的亮蓝色物质。
1.1. 2乙二胺测试
把干滤纸放在培养皿底部，并将试样均匀地喷洒在滤纸上，再将一定量的乙二胺分布于滤纸边缘，用显微镜在10X档观测，若有深红色物质生成则为呋喃唑酮。然而，在动物饲料中常混有血粉，也会与乙二胺试剂反应呈深红色而干扰试验，加上此法为半定量法，故存在一定的局限性。
1.2分光光度法
本法的机理是在DMF介质溶液中，呋喃唑酮与苯肼盐酸溶液反应生成在440nm处有强吸收的亮黄色物质。因其最佳工作曲线测定范围是0－50mg/kg，故称取相应质量的碾碎过筛的饲料样品于锥形瓶中，准确加入DMF，加盖，在水浴锅中煮沸5min，再置于调速振摇皿上振摇10min后，于快速滤纸上过滤。取一定体积的滤液酌量稀释到容量瓶中即制得试样。取同等体积的试样和用DMF配制的各标准工作溶液于比色管中，向每支管中加入5mL苯肼盐酸溶液，混匀后置于70℃水浴中25min，再于15℃水浴中冷却5min，然后准确加入甲苯到各比色管中，加盖，振摇一定时间后将甲苯层用脱脂棉滤入比色皿中，使用分光光度计于440nm处读取吸光值，进行测定。此法简单易行，准确度较高，对于设施不太完善的实验室有较好的应用价值。
1.3高效液相色谱法（HPLC）现在据资料可查的较常用的3种HPLC法其色谱条件基本一致：采用光脉冲式泵，流速控制在0.l－2.0mL/min；若为进样环则体积为20－50mL；紫外可见检测器（UV）波长为365nm；保护柱：反相柱C18或C8（柱填料粘度≤10μm）柱均可。这3种方法的差异主要在于试样的前处理，以及由此而选用的流动相和标准溶液的配制。
1.3.1乙腈－水溶出法
此法是利用乙腈和水将一定质量的粉碎过筛的饲料样品溶出，离心后准确量取一定体积的上清液置于分液漏斗中，用正己烷提取二次后弃去，水层则用氯仿提取二次合并提取液，用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的干燥滤器过滤，而滤器又用氯仿3次洗涤，合并滤液与洗液于250mL蒸馏瓶中，40℃下减压旋转蒸发至于后，向残渣中准确加入乙腈，使呋喃唑酮充分溶解，最后离心10min，清液上HPLC检测。因试样是用乙腈提取，故呋喃唑酮的标准溶液和标准工作溶液也用乙腈溶解、定容，上HPLC后制作标准曲线。流动相则采用乙腈一0.05 M磷酸二氢钾-三乙醇胺（30∶70∶1），pH＝6.0，流速为1.0mL/min。由于呋喃唑酮微溶于氯仿，不溶于水，按照萃取过程的两相分配理论，用氯仿进行萃取和洗涤提取不够完全，加之此法操作步骤较多，造成不同程度的损失，故测定结果偏低。
1.3.2用乙腈一2%乙酸（蒸馏过的）＋去离子水（20＋80）作流动相流速控制为1.5mL/min，用DMF将0.110±0.05g呋喃唑酮样品稀释定容成110μg/mL的中间标准液，再用等体积的5%四乙基铵溴漠化物（TEAB）将中间液制成55μg/mL的标准工作液（需每日现配）。此法对配合饲料和预混料的前处理方法有异。检测配合饲料，根据标准工作液的量称取碾细混匀的样品到蒸馏套管中，加入一定量的丙酮一水（93+7）的提取液，蒸馏提取8h以上（在蒸馏过程中若发现烧杯中有水，就应加入一定量的丙酮以除去所有的水）。蒸发完后，立即从气浴上移开，加入DMF，再在气浴上加热使所有残余物溶解在DMF中。加入5%TEAB，混合，将溶液注入离心管，冷却后再于2000r/min转速离心数分钟，取上清液，即为制得试液。检测预混料，直接称取样品于锥形瓶中，准确加入DMF，加盖振摇30min，过滤提取物，用DMF稀释到约含呋喃唑酮110μg/mL。取等量5%ThAB和稀释提取物，混匀，冷却至室温后于2000r/min转速离心数分钟，取上清液，即为制得试液。此法尽管准确度较高，但操作较复杂，而且所用的流动相有较强的酸性，对色谱柱有一定的要求。
1.3.3用乙腈－甲醇（1＋1）作为提取剂制备呋喃唑酮贮备液和工作液
将乙腈一甲醇（1＋1）准确加入装有一定质量样品的锥形瓶中，加盖，于回旋振荡器上振摇30min，过中性氧化铝（活度为1）层析柱，弃去前数mL流出液，取随后流出的流出液过滤膜系统，待上HPLC检测，若有必要用提取剂稀释。此法所用流动相为乙酸钠缓冲液（pH6.0）一乙腈（4＋1），流速为 0.6mL/min。由于柱层析是靠重力或静压加速流动相流经色谱柱，分离的组分流程周期长，操作难以连续进行。故在实际应用中，我们在振摇静置后，取提取液高速离心取上清液过有机相滤膜系统后，待上HPLC检测。可结合具体仪器配置，选用流动相的比例调整为乙酸钠缓冲液（pH6.0）一乙腈（70%＋30%），流速选用0.8mL/min，测定结果较理想。
2呋喃唑酮测定过程中注意事项
2.l检测条件
因呋喃唑酮对光敏感，所有操作都应尽量避光；配制溶液应在通风橱内进行；试验中所用贮备液贮于棕色瓶中，并于0－8℃冰箱中保存，有效期为1个月。工作液则每批样品用时现配。
2.2检测人员在试验中，操作人员应避免试液接触皮肤和眼睛，避免吸入粉末。一旦进入眼睛应立即用水冲洗15min以上；一旦接触皮肤，应立即用肥皂或柔和的洗涤剂洗去。
