一例新城疫的实验室诊治报告

1发病情况及临床症状

该养鸽户饲养1．5岁的种鸽620只，10月18日给种鸽肌肉注射鸡I系苗1头份／只，30-40日龄肉鸽200只，但未免疫疫苗。鸽群发病2天，种禽死亡2只，死亡率为0．32％，肉鸽死亡78只，死亡率为39％，使用恩诺沙星进行治疗，但效果不明显。病鸽精神不振，食欲减退，饮水量增加，羽毛松乱无光泽，垂头缩颈，翅膀松散下垂，口鼻分泌物增多。部分鸽子还出现神经症状，如头颈扭曲，头向后仰。粪便先由黑色粒状，后转为黄绿色稀便。

2剖检病变

喉头、气管分泌物增多，嗦囊内充满酸臭液体及气体，腺胃乳头有出血点，心包周围、肝表面覆盖一层黄色胶胨样物。十二指肠、小肠出血，肠系膜脱落、溃疡，盲肠扁桃体肿大出血。种鸽卵巢出血。

3实验室诊断

3．1样品处理

取脾和肺进行研磨，加人生理盐水制成20％的乳剂，反复冻融3次，于零下20度保存以备用。

3．2 RT-PCIZ

RT-PCR结果见图1。



RNA提取与反转录(RT)。取制备好的病料悬液，按RNA提取试剂盒说明书进行提取，得到的RNA模板立即用于反转录。反转录体系为25微升，RNA模板16微升，引物M1 2微升，5xBuffer5微升，dNTP 2微升，RNasin0．5微升，M-MLV0．5微升。置PCR仪中42℃反转录1小时，95℃5分钟，反应结束后直接使用或于零下70度保存。

PCR扩增。取反转录产物5．0微升加入到新城疫PCB反应A混合物的PCB管中，混匀，2000转／分钟离心10秒，立即进行PCR扩增；同时设阴阳性对照。扩增条件为94度4分钟，94度30秒，56度50秒，72度50秒,35个循环，72度延伸5分钟，4度保存。取反应A的反应物0．5微升加入到新城疫PCB反应B混合物的PCR管中，混匀，2000转／分钟离心10秒，立即进行PCR扩增；同时设阴阳性对照，扩增条件为94度4分钟，94度30秒，56度50秒，72度50秒，35个循环，72度延伸5分钟，4度保存。

琼脂糖凝胶电泳。取PCR产物5微升，于1％琼脂糖凝胶中电泳，凝胶牛含有13．5微升／毫升溴化乙锭，电泳缓冲液为0．5xTAE，80伏30分钟，电泳完后于紫外灯下观察拍照，有460bp的目的带出现。

3．3病毒分离鉴定

将3．1处理的样品，加入“双抗”(青霉素、链霉素)(2000单位／毫升)，感作l小时，然后离心取上清液接种10日龄的SPF鸡胚2枚，37度孵育，接种后鸡胚分别在36小时和40小时死亡，收集尿囊液，做红细胞凝集试验(HA)，红细胞出现凝集，HA效价为28和27。

用新城疫阳性血清做血凝抑制试验(HI)，可抑制新城疫病毒对红细胞的凝集，抑制价是27。

由此证明此鸽群发生的为新城疫病。

4防治

鸽群紧急免疫新城疫Ⅵ系苗，种鸽4羽份／只，肉鸽3羽份／只进行滴鼻。

每天的饮水中加入0．05％的氟苯尼考和3％的葡萄糖供鸽子饮用，连用3天，增强鸽子的抵抗力，防止继发感染。

保持饲料和饮水的清洁卫生，保证鸽舍的通风干燥，加强鸽舍的保暖措施，彻底清除鸽舍内的粪便及污物，用消毒剂进行消毒。

3天后回访，除肉鸽紧急免疫后死亡8只外，其余的肉鸽、种鸽病情已得到控制，并恢复正常。