奶牛母牛的胚胎移植技术

　　俗称借腹怀胎，是提高良种母牛繁殖潜力、加快品种更新的一项实用高新技术。主要包括供体、受体的准备，供体的超数排卵与配种，胚胎的收集、检查、冷冻保存和移植等几个基本环节。 

　　1．供体、受体的准备 供体、受体均要求为青壮年牛，膘情中等偏上，繁殖机能正常，一般应有2个以上正常的繁殖周期。此外，供体应是良种，鲜胚移植时，供、受体发情要同步，数量比例要适当，一般为1:5-8为宜。 2．供体的超数排卵与配种 牛每次发情后一般只排一个卵，利用外源性促性腺激素处理能使卵巢一次排出多个卵子，即为超数排卵技术。 通常在母牛发情周期的第9-14天肌肉注射FSH进行超排处理，连续注射4天，每日早晚各一次，总量为40-50毫克，剂量均等或递减，第三天的第五次注射时，同时注射PGF2a。，一般在注射48小时后，母牛即发情排卵。 超排处理以后的发情供体母牛，用活率高、密度大的优良公牛精液配种，适当增加人工授精的次数，两次输精间隔8-10小时。 

　　3．胚胎的收集 牛胚胎移植通常用非手术法，利用双通式导管冲卵器多次向子宫角注入冲卵液，反复冲洗回收桑椹至囊胚期胚胎。 

　　4．胚胎的检查 在实体显微镜下从回收的冲卵液中检出胚胎，主要依据形态学进行分类，选发育阶段正常，外形匀称，卵裂球比较紧密的A、B级胚胎可供移植或冷冻保存。目前，每头供体牛一般可获得8枚左右可用胚。 

　　5．胚胎的冷冻保存 胚胎冷冻保存可以克服鲜胚移植受时间、地点等因素的限制，为胚胎移植技术推广应用和充分发挥其优势提供了保证。冷冻方法有缓慢降温法、快速冷冻法和一步冷冻法等3种。快速冷冻法因胚胎解冻后存活率及移植成功率较高，为目前生产中最常用的方法。简要介绍如下：室温条件下，先将胚胎加入1.4摩尔甘油冷冻液中脱水平衡20分钟，再装入0.25毫升细管，然后将装有胚胎的细管放入程控冷冻仪中，0℃平衡10分钟，以1℃/分的速度降至-6－-7℃，人工植冰并平衡10分钟，然后以0.3℃/分的速度降温至-35－-38℃，投入液氮保存。解冻时从液氮中取出装胚胎的细管，立即投入37℃水浴中，并轻轻摆动，1分钟后取出即完成解冻过程。然后用0.2-0.5摩尔蔗糖PBS液分两步或一步法脱除冷冻保护剂使胚胎复水，最后移人PBS培养液中准备移植。 

　　6．胚胎的移植 将胚胎吸入0.25毫升细管中，两端有小气泡固定保护。采用直肠把握子宫颈法，利用卡苏枪非手术法将胚胎移植入黄体侧子宫角大弯的前端。胚胎移植给受体后，要加强护理，移植后不要频繁地进行直肠检查，以防流产。注意观察受体牛的返情情况，对于未发情的受体牛，应在移植2个月后通过直肠检查来判断是否怀孕。